INC國際兒童腦瘤大咖、世界小兒神經(jīng)系統(tǒng)專業(yè)雜志《Child´s Nervous System》現(xiàn)任主編Concezio Di Rocco教授發(fā)表研究《ADAR2-editing activity inhibits glioblastoma growth through the modulation of the CDC14B/Skp2/p21/p27 axis》（ADAR2編輯活性通過調(diào)控CDC14B/Skp2/p21/p27軸抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長），以下是研究簡述。

　　01

　　PART

　　研究摘要

　　IV級星形細(xì)胞瘤（多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，GBM）是人類最具侵襲性和致死性的腫瘤之一。ADAR2介導(dǎo)的A→I RNA編輯是腦組織必需轉(zhuǎn)錄后修飾事件，但在GBM及星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系中顯著受損，其功能尚未闡明。本研究證實(shí)，在星形細(xì)胞瘤中恢復(fù)ADAR2編輯可阻止體內(nèi)腫瘤生長，并調(diào)控GBM中常失調(diào)的Skp2/p21/p27細(xì)胞周期通路。ADAR2脫氨酶活性為抑制腫瘤生長所必需。我們首次發(fā)現(xiàn)磷酸酶CDC14B是該通路的上游關(guān)鍵新型ADAR2靶基因：ADAR2對CDC14B前體mRNA的編輯提高其表達(dá)，進(jìn)而降低Skp2蛋白水平，該機(jī)制在體外與體內(nèi)模型均獲驗(yàn)證。與正常腦組織相比，CDC14B的編輯率和表達(dá)水平從I級至IV級星形細(xì)胞瘤逐漸下降，在GBM中幾乎缺失。

　　綜上，

　?。?）A→I RNA編輯對GBM發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要；

　?。?）ADAR2編輯酶是新型候選抑癌基因；

　?。?）ADAR2或其底物可作為更安全、有效的GBM治療新靶點(diǎn)。

　　02

　　PART

　　研究結(jié)果

　　圖1 ADAR2編輯活性通過調(diào)控細(xì)胞周期影響星形細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖

　　(a)U118親本細(xì)胞、ADAR2過表達(dá)細(xì)胞及酶失活突變體ADAR2 E/A細(xì)胞的總蛋白免疫印跡檢測ADAR2表達(dá)。

　　(b)以β-肌動蛋白為內(nèi)參，相對蛋白表達(dá)量以任意單位表示，以內(nèi)源水平設(shè)為1。

　　(c)5×10?U118細(xì)胞增殖曲線：未處理（淺灰）、空載體（深灰）、ADAR2（紅）及ADAR2 E/A（黑）第1–4天結(jié)果。誤差條為5次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)s.d.，Mean±s.d.(n=5)，*P<0.05、**P<0.01 vs ADAR2 E/A。

　　(d)5×10?細(xì)胞BrdU/PI雙標(biāo)記流式周期分析（FACSCanto II）：ADAR2（紅）與ADAR2 E/A（黑）接種后24–48 h示例。Mean±s.d.(n=3)，*P<0.05、**P<0.01；采用Click-iT EDU試劑盒獲一致結(jié)果。

　　(e)5×10?細(xì)胞第1–4天凋亡檢測：ADAR2（紅）與ADAR2 E/A（黑）。Mean±s.d.(n=3)。

　　圖2 ADAR2編輯活性抑制星形細(xì)胞瘤體內(nèi)生長

　　(a)2.5×10?U118親本、空載體、ADAR2及ADAR2 E/A細(xì)胞腫瘤生長曲線。腫瘤體積以首次測量值（設(shè)為1）的倍數(shù)表示（y軸），x軸為注射后天數(shù)。Mean±s.d.(n=20)，**P<0.01 vs ADAR2 E/A腫瘤。

　　(b)上述各組小鼠的Kaplan–Meier累積生存曲線。

　　(c)注射后15 d（指數(shù)生長期）取瘤行免疫組織化學(xué)：左圖示代表性視野，分別用抗-GFP、抗-Ki67及TUNEL染色（箭頭示凋亡細(xì)胞）；右圖示U118未處理（淺灰）、空載體（深灰）、ADAR2（紅）及ADAR2 E/A（黑）腫瘤中GFP、Ki67、TUNEL陽性細(xì)胞百分比。Mean±s.d.(n=10)，**P<0.01。

　　圖3 ADAR2表達(dá)對p27/p21/Skp2通路的體內(nèi)外分析

　　(a)空載體、ADAR2及ADAR2 E/A細(xì)胞總蛋白的p27、p21、Skp2免疫印跡。

　　(b)15天移植瘤免疫組化：ADAR2與ADAR2 E/A腫瘤代表性視野（p27、p21、Skp2染色）。

　　(c)移植瘤（15天）IHC陽性細(xì)胞百分比：未處理U118（淺灰）、空載體（深灰）、ADAR2（紅）、ADAR2 E/A（黑）。Mean±s.d.(n=10)，**P<0.01。

　　(d)qRT–PCR檢測上述細(xì)胞系p27、p21、Skp2 mRNA水平。Mean±s.d.(n=4)。

　　(e)空載體、ADAR2、ADAR2 E/A細(xì)胞總蛋白的CDK4、CDK2、Cyclin D1、Cyclin E免疫印跡。

　　圖4 ADAR2介導(dǎo)的RNA編輯在體內(nèi)外調(diào)控CDC14B表達(dá)

　　(a)U118基因組DNA（gDNA）、U118親本cDNA及U118-ADAR2 cDNA中CDC14B內(nèi)含子7–8區(qū)域測序色譜圖。編輯位點(diǎn)（1–4I、13I）呈A（綠）與G（黑）雙峰，右側(cè)標(biāo)注編輯率。

　　(b)半定量RT–PCR檢測CDC14B前體mRNA與成熟mRNA：ADAR2 vs ADAR2-E/A，表達(dá)量以ADAR2-E/A設(shè)為1的相對倍數(shù)表示，β-肌動蛋白內(nèi)參，引物見附表S1。

　　(c)qRT–PCR檢測CDC14B mRNA：空載體、ADAR2、ADAR2-E/A細(xì)胞。Mean±s.d.(n=3)，*P<0.01。

　　(d)免疫印跡檢測CDC14B蛋白（左）及光密度定量（右）。

　　(e)ADAR2與ADAR2-E/A移植瘤CDC14B免疫組化代表性視野。

　　圖5 ADAR2編輯上調(diào)CDC14B表達(dá)并調(diào)控細(xì)胞增殖

　　(a)ADAR2-U118細(xì)胞及其scramble（scr）或siADAR2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的總蛋白ADAR2免疫印跡。

　　(b)內(nèi)源性CDC14B轉(zhuǎn)錄本測序圖，箭頭示隨機(jī)位點(diǎn)編輯率。

　　(c)qRT–PCR檢測CDC14B mRNA：ADAR2、scrADAR2、siADAR2組。Mean±s.d.(n=2)，**P<0.01。

　　(d)增殖曲線：未處理U118、ADAR2、scrADAR2、siADAR2。Mean±s.d.(n=3)，*P<0.05、**P<0.01 vs siADAR2。

　　(e)A172細(xì)胞沉默內(nèi)源ADAR2后24、48、72 h的ADAR2與CDC14B qRT–PCR。Mean±s.d.(n=2)，*P<0.05、**P<0.01 vs scrADAR2。

　　(f)A172 scramble與ADAR2沉默株增殖曲線。Mean±s.d.(n=2)，**P<0.01。

　　圖6 ADAR2介導(dǎo)的CDC14B表達(dá)對星形細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的重要性

　　(a)U118細(xì)胞轉(zhuǎn)染CDC14B-flag或失活突變體C314S-CDC14B-flag后48、72 h的Skp2蛋白Western blot。

　　(b)對應(yīng)增殖曲線；Mean±s.d.(n=2)，*P<0.05。

　　(c)(d)U87細(xì)胞重復(fù)(a)(b)實(shí)驗(yàn)；Mean±s.d.(n=2)，*P<0.05，**P<0.01。

　　(e)“沉默-再表達(dá)”策略示意圖：ADAR2-U118細(xì)胞先穩(wěn)定沉默內(nèi)源CDC14B（0 h），24 h后（內(nèi)源降低約90%）等量轉(zhuǎn)染CDC14B-flag（紅）或C314S-CDC14B-flag（黑）。

　　(f)增殖曲線：沉默內(nèi)源CDC14B的ADAR2-U118（灰）及再轉(zhuǎn)染CDC14B-flag（紅）或C314S-CDC14B-flag（黑）組，以未處理ADAR2-U118（藍(lán)）為對照；Mean±s.d.(n=2)，**P<0.01（72、96 h C314S vs CDC14B-flag）；*P<0.05（ADAR2-U118 vs兩組突變/再表達(dá)）。

　　(g)上述再表達(dá)實(shí)驗(yàn)中72、96 h的Skp2蛋白Western blot。

　　圖7 CDC14B轉(zhuǎn)錄本在星形細(xì)胞瘤與正常腦組織中的編輯率與表達(dá)水平

　　(a)CDC14B內(nèi)含子7–8 AluJr區(qū)域13個(gè)編輯位點(diǎn)(1–13I)的編輯百分比：正常腦組織(黑，n=3)、I級(深灰，n=7)與IV級星形細(xì)胞瘤(淺灰，n=12)。

　　(b)代表性測序色譜：白質(zhì)對照(Ctrl)gDNA(上)及cDNA、I級與IV級腫瘤cDNA；箭頭示編輯位點(diǎn)及百分比。

　　(c)CDC14B mRNA qRT–PCR：正常腦、I級與IV級腫瘤。Mean±s.d.(n=3)，*P<0.05，**P<0.01。

　　(d)CDC14B免疫組化：IV級、I級腫瘤與正常腦(Ctrl)；內(nèi)皮細(xì)胞為內(nèi)參陽性對照(右下)。

　　(e)各組織CDC14B編輯水平與mRNA表達(dá)相關(guān)性：正常(黑點(diǎn))、I級(深灰點(diǎn))、IV級(淺灰點(diǎn))標(biāo)本；示顯著相關(guān)示例，采用Spearman非參數(shù)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　圖8 ADAR2在星形細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖中的作用模式圖

　　ADAR2通過（直接和/或間接）促進(jìn)CDC14B RNA編輯及過表達(dá)，驅(qū)動CDC14B蛋白升高；CDC14B誘導(dǎo)Skp2降解，進(jìn)而上調(diào)p21與p27，使細(xì)胞周期阻滯于G1期，從而抑制增殖。

　　03

　　PART

　　關(guān)于作者

　　小兒神經(jīng)外科，專注于解決兒童諸多神經(jīng)外科疾病，諸如腦腫瘤、腦積水、小兒癲癇、先天畸形等，一直被稱為難度最大的外科專業(yè)之一。Concezio Di Rocco教授曾受到來自法國、埃及、吉爾吉斯斯坦等國家的邀請進(jìn)行講座和現(xiàn)場演示，且聯(lián)合全球知名小兒神外專家創(chuàng)辦了兒童神經(jīng)外科研究所課程。

　　該項(xiàng)課程在過去30年里為世界培養(yǎng)了無數(shù)兒童神經(jīng)外科醫(yī)生，包括目前國內(nèi)若干知名三甲醫(yī)院的兒童神經(jīng)外科主任專家，都曾是他的學(xué)生。Concezio Di Rocco教授將其領(lǐng)先的治療技術(shù)分享給世界各地兒科神經(jīng)外科醫(yī)生進(jìn)行借鑒參考和學(xué)習(xí)，為世界兒科神經(jīng)外科的發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。Di Rocco教授曾到訪蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，為6名神經(jīng)外科疑難雜癥孤兒進(jìn)行義診。

Di Rocco教授一生撰寫或參與撰寫的兒童神經(jīng)外科部分著作

　　國際兒童神經(jīng)外科學(xué)會主席(ISPN)(1991-1994年)

　　世界神經(jīng)外科聯(lián)合會教育委員共同主席(2013-2017年)

　　世界神經(jīng)外科聯(lián)合會兒童神經(jīng)外科委員會主席(2001-2009年)

　　世界小兒神經(jīng)系統(tǒng)知名雜志《Child´s Nervous System》現(xiàn)任主編

　　國際兒童顱底學(xué)會主席(創(chuàng)始成員)

　　世界神經(jīng)外科聯(lián)合會基金小兒腦積水項(xiàng)目負(fù)責(zé)人

　　德國漢諾威國際神經(jīng)科學(xué)研究所兒科神經(jīng)外科主任(2013年至今)

　　歐洲神經(jīng)外科學(xué)會(EANS)前副主席

　　世界神經(jīng)外科學(xué)會聯(lián)合會(WFNS)兒科委員會曾任主席

　　羅馬天主教大學(xué)醫(yī)學(xué)院兒科神經(jīng)外科學(xué)系主任

　　國際兒童神外專家Concezio Di Rocco教授

　　自2014年5月起，Di Rocco教授就擔(dān)任了德國漢諾威國際神經(jīng)科學(xué)研究所(INI)的兒科神經(jīng)外科主任。從事兒童神外事業(yè)50余年，Di Rocco教授尤為擅長小兒神經(jīng)纖維瘤、癲癇、腦積水、蛛網(wǎng)膜囊腫、顱縫早閉、腦和脊髓腫瘤、腦和脊柱畸形（半椎體畸形，皮質(zhì)發(fā)育不良，脊髓脊膜膨出，脊髓內(nèi)脂肪瘤，Arnold-Chiari畸形等）難治病癥方面的治療，曾進(jìn)行過12000多次神經(jīng)外科手術(shù)。

• 文章標(biāo)題：【INC國際大咖研究成果】ADAR2編輯活性通過調(diào)控CDC14B/Skp2/p21/p27軸抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長
• 更新時(shí)間：2025-10-06 12:09:33